Sıvı Kromatografi-Ardışık Kütle Spektrometresi ile Vitamin D Analizinde Örnek Stabilitesi

Amaç: Vitamin D, hücre büyümesinde, bağışıklık sisteminde ve metabolizmada çeşitli işlevlere sahiptir. Vitamin D eksikliği, rikets ile ilişkili olup bunun yanında immun sistem hastalıkları, kanser, kalp krizi (MI), diyabet ve bulaşıcı hastalıkların riskini arttırmaktadır. Bu çalışmanın amacı, analiz edilmek üzere alınan plazma örneğine ait saklama şartlarının sıvı kromatografi-ardışık kütle spektrometresi (LC-MS/MS) ile tayin edilen vitamin D testi üzerine etkilerini araştırmaktır. Gereç ve Yöntem: Ankara Numune Eğitim ve Araştırma Hastanesi (A.N.E.A.H) polikliniklerine başvuran hastalardan rastgele alınan kan örnekleri K2-EDTA içeren tüplere (n35) konulup 30 dakika içerisinde santrifüj edildikten sonra plazmaları üç porsiyona ayrıldı. Çalışma için üç grup oluşturuldu. Grup 1 oda sıcaklığında saklanan 35 örnek, grup 2 buzdolabında 2-8Cde saklanan 35 örnek ve grup 3, -80Cde dondurulmuş halde saklanan 35 örnek olarak ayrılıp vitamin D analizleri bir gün sonra sıvı kromatografitandem kütle spektrometresi ile Ankalab Laboratuvarında gerçekleştirildi. Bulgular: Statistical Package for the Social Sciences (SPPS) versiyon 15 ile Wilcoxon testi kullanılarak yapılan istatistiksel analizde Grup 3e ait vitamin D değerleri Grup 1 ve 2 ye kıyasla anlamlı olarak yüksek bulunurken (her ikisi için p0.001) Grup 1 ve 2 nin Vitamin D değerleri arasında istatistiksel bir fark gözlenmemiştir (p0.051). Sonuç: Buna göre sıvı kromatografi-ardışık kütle spektrometresi ile gerçekleştirilen vitamin D analizlerinde aynı gün içerisinde çalışma yapılmayacaksa plazma örneklerinin analizin gerçekleştirileceği zamana dek dondurulması elde edilen sonuçlar açısından daha anlamlı olacaktır.

Objective: Vitamin D has several functions in cell growth, immunity, and metabolism. Vitamin D deficiency has been associated with rickets. In deficient states, there is a higher risk for autoimmune diseases, cancers, myocardial infarction, diabetes, and infectious diseases. The aim of the present study was to investigate the effect of storage conditions for vitamin D analysis by liquidchromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Materials and Methods: Blood samples (n35) were randomly obtained on K2-EDTA containing tubes from the subjects referred to Ankara Numune Training and Education hospital polyclinics. Plasma was obtained by centrifugation and three aliqouts were stored. According to the study design, three different groups were constituted. Group 1 consisted of plasma samples stored at room temperature (n35), Group 2 consisted of plasma samples stored at 2-8°C (n35) and group 3 consisted of plasma samples stored at -80°C (n35). Vitamin D analysis was performed by liquid-chromatography tandem mass spectrometry at Ankalab Laboratory on the next day. Results: Statistical analysis was performed by Wilcoxon test with SPSS v15. Group 3 vitamin D results were significantly higher than both Group 1 and 2 (for both p<0.001). There was no statistically difference between Group 1 and 2 vitamin D results (p0.051). Conclusion: According to these results, if the plasma samples are not to be analyzed on the same day, vitamin D analysis by liquid-chromatography tandem mass spectrometry will be more reliable by freezing plasma samples immediately after centrifugation.